Trở thành với xã Schizophyllum: Tạo nền văn hóa vô trùng từ nấm tìm thấy: 3 bước (có hình ảnh)

2024 Tác giả: John Day | [email protected]. Sửa đổi lần cuối: 2024-01-30 13:35

Tài liệu hướng dẫn này tập trung vào việc giải thích cách tạo ra môi trường nuôi cấy vô trùng của nấm Schizophyllum Commune (tên thường gọi là nấm Split Gill) trên đĩa petri bằng cách sử dụng các loại nấm đã tìm thấy. Xã Schizophyllum đã được phát hiện có hơn 28.000 giới tính, có thể được tìm thấy ở tất cả các lục địa ngoại trừ Nam Cực, và có khả năng (giống như các loại "nấm thối trắng và nâu" khác) để phân hủy ô nhiễm gây rối loạn nội tiết (nhựa, hormone bắt chước hóa dầu công nghiệp như phân bón Atrazine, chất làm dẻo Bisphenol-A, hoặc hormone tổng hợp Diethylstilbestrol).

Tôi sẽ xem xét các kỹ thuật nhận dạng nấm hoang dã, cách tạo đĩa petri thạch dinh dưỡng và cách sử dụng nấm tìm thấy của bạn để nuôi cấy phân lập vô trùng trong đĩa petri của bạn. Các tài liệu hướng dẫn khác trong loạt bài này đề cập đến các kỹ thuật như xác định gen của nấm, các xét nghiệm enzym đơn giản để kiểm tra khả năng phân hủy nhựa và ô nhiễm bắt chước hormone của nấm, và cách sản xuất pho mát bằng S. Commune.

Dự án này xuất phát từ công việc hợp tác của Mary Maggic, Paula Pin và tôi trong thời gian cư trú tại HANGAR ở Barcelona, Tây Ban Nha vào mùa thu tháng 9 năm 2018. Để biết thêm thông tin về dự án, hãy đọc tiếp ~~ hoặc bỏ qua tất cả Bla Bla và chuyển thẳng đến Bước 1 cho hướng dẫn:)

Hình ảnh được lấy từ các tệp Schizophyllum Commune Fanzine ~ có thể được tải xuống miễn phí tại đây

Trong thời gian cư trú, ba mục tiêu chính của chúng tôi là:

1 ~ Nghiên cứu và tìm hiểu các tài liệu khoa học về xã Schizophyllum và các tương tác khác nhau của nó với các hormone và nội tiết phá vỡ các chất ô nhiễm hóa dầu. S. Commune là một trong nhiều loại nấm "thối trắng và nâu" với khả năng phá vỡ ô nhiễm gây rối loạn nội tiết và nội tiết. Những loại nấm này ăn cây bằng cách bài tiết các enzym "lignocellulosic" từ các cơ thể có mạng lưới hoặc "sợi nấm" của chúng và các enzym này có thể phân hủy cellulose và lignin mà cây được tạo ra. Do sự tương đồng về cấu trúc giữa cellulose, lignin và EDS '/ Hormone như Atrazine, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol và Nonylphenols, các enzyme "lignocellulosic" do nấm tiết ra cũng có thể phân hủy nhiều loại chất độc hại. Ngoài ra, S. Commune tạo ra các polysaccharide kích thích miễn dịch có ích như thuốc ngăn ngừa và điều trị ung thư (Được chấp thuận ở Nhật Bản để điều trị ung thư cổ tử cung), có thể tăng cường các đặc tính phytoestrogen của một số loại thực vật thông qua quá trình lên men, có thể được sử dụng thay thế cho men dịch vị và lactobacilius trong quá trình tạo pho mát và sản xuất các enzym làm tan cục máu đông thrombin (hữu ích trong điều trị huyết khối). Thật kỳ lạ, những "beta-glucans" tương tự này có thể được chiết xuất bằng nước sôi như phương pháp điều trị ung thư và chất kích thích miễn dịch, cũng được sử dụng bởi ngành công nghiệp dầu mỏ để nâng cao sản lượng dầu, buộc S. Commune trong một vòng phản hồi hai bên đối với việc sản xuất nội tiết gây rối loạn. hóa dầu nó có thể phân hủy và ngay lập tức.

2 ~ Phát triển các giao thức DIY và DIWO (làm điều đó với những người khác) để đơn giản hóa các giao thức này để làm việc với EDC và nấm để dịch kiến thức khoa học được hệ thống hóa sang một ngôn ngữ dễ tiếp cận hơn. Sử dụng những phản hồi này để giáo dục, để đặt câu hỏi, để chống lại sự thực dân hóa phân tử và tạo ra những câu chuyện mới về sự trở thành đa loài và khả năng gây đột biến tập thể của chúng ta.

3 ~ Thách thức diễn biến cisheteronormative, kỳ lạ chiếm ưu thế xung quanh các hóa chất gây rối loạn nội tiết (EDC's). Để trích dẫn học bổng của Malin Ah-King và Eva Hayward về các vấn đề này, "Nhiều hãng tin đang đưa tin về những câu chuyện nội tiết đáng sợ này từ sân sau của chúng tôi. đe dọa tình dục và tình dục. Thay vì giải quyết nhiều nguy cơ sức khỏe khác liên quan đến phơi nhiễm chất độc, các vấn đề giật gân và luận chiến nhất được tranh luận và phản ứng quan trọng. Nó đặt ra câu hỏi: Tại sao tình dục lại là trọng tâm hơn ung thư, bệnh tự miễn dịch, và thậm chí là cái chết? Những dây thần kinh văn hóa nào (nhiều trong số đó được toàn cầu hóa), được kích hoạt? Và, đối với những người trong chúng ta có mối quan tâm về nữ quyền, làm thế nào để chúng ta định hướng cuộc tranh luận khỏi chủ nghĩa bản chất, phân biệt giới tính và thuyết dị bản? " (Giới tính độc hại).

Schizophyllum Commune là một loại "nấm thối trắng" độc đáo ở chỗ nó đã được tìm thấy có hơn 28.000 giới tính di truyền. Sự thích nghi này, theo nhiều giả thuyết, đã tạo ra sự đa dạng di truyền đáng kinh ngạc của loài này tồn tại ở mọi lục địa trên thế giới ngoại trừ Nam Cực. Chúng tôi muốn tôn vinh sự đa dạng về giới tính tuyệt đẹp của sinh vật này như một ví dụ về sự kỳ lạ của sinh học. Các diễn ngôn chủ đạo xung quanh EDC trên các phương tiện truyền thông, và thậm chí từ các nhà hoạt động môi trường tập trung nhiều vào những câu chuyện phi khoa học, rằng những phân tử này gây ra một số tính chất hoặc giới tính nhất định mà xã hội của chúng ta mắc phải, dán nhãn là không chuẩn mực và thường tìm cách loại bỏ hoặc tránh né. Không chỉ tập trung vào sự phản đối kịch liệt của công chúng về sự phản đối phi thực tế về mặt khoa học của EDC (hormone và chất gây rối loạn nội tiết không chỉ khiến con người trở nên hoang mang hoặc chuyển giới) mà còn bỏ qua tất cả những tác động thực sự tàn khốc mà chúng ta có thể liên kết với EDC: béo phì, rối loạn tuyến giáp, một số bệnh ung thư, trong số các nguy cơ sức khỏe khác.

Bước 1: Tìm xã Schizophyllum sống trong cộng đồng của bạn

Các mẫu cấy vô trùng cấp phòng thí nghiệm của Schizophyllum Commune có thể được mua với giá khoảng 350 đô la từ một ngân hàng nuôi cấy vi sinh như ATCC… đó là lý do tại sao chúng tôi chọn nuôi cấy từ nấm hoang dã miễn phí:)

Tôi đã thấy dễ dàng vì tôi đã đọc về Schizophyllum Commune và chỉ một ngày nọ, tôi tình cờ nhận thấy nó mọc trên một cái cây trước căn hộ của tôi. Nếu bạn không may mắn tình cờ bắt gặp S. Commune trong khu phố của mình, bạn sẽ muốn đến một khu vực nhiều cây cối để tìm kiếm những cây nấm "khung" mọc trên những cây gỗ cứng ốm (những cây trông giống như chúng không hoạt động quá tốt) hoặc cây đổ. S.commune là một trong những loại nấm phổ biến hiện có trên khắp thế giới và về cơ bản có thể được tìm thấy ở bất cứ nơi nào có gỗ cứng để phát triển.

Mushroomobserver.org cung cấp mô tả chi tiết tuyệt vời về vị trí và thời điểm bạn có thể tìm thấy S. Commune, cũng như cách xác định nó và cách tránh "bí danh" có thể dẫn đến nhận dạng sai:

NHẬN DẠNG: Schizophyllum được dễ dàng nhận biết bởi mang chẻ đôi, lông rậm và nắp hình quạt. Mũ rộng 1-4,5cm và thường là hình vỏ hoặc hình quạt với bề mặt từ xám đến trắng. Bào tử phân sinh có kích thước 5-7,5 × 2 -3 micromet. Một loại nấm tương tự được biết đến với tên gọi là “Crimped Mang” Plicaturopsis crispa không được phân bố rộng rãi.

THÓI QUEN: Schizophyllum xã phát triển trên gỗ cứng bằng cách sử dụng các enzym để phân giải lignin và gây ra “thối trắng”. Vì vậy, nó được tìm thấy ở hầu hết các khu vực nhiều cây gỗ. Nó có thể được tìm thấy quanh năm do khả năng khô, bù nước trong điều kiện tốt hơn, và sau đó tiếp tục sinh sản.

Loại nấm này có thể ký sinh trên những cây có đường kính nhỏ đang chịu áp lực từ các yếu tố khác, chẳng hạn như hạn hán.

HÃY NHÌN BIẾT: Plicaturopsis crispa hoặc "Mang uốn" tương tự như Gill tách. Nó cũng có vỏ / quả thể hình quạt. Tuy nhiên nắp có màu nâu đỏ hoặc nâu vàng, và mặt dưới rất đặc biệt. Nó có các tĩnh mạch gấp khúc giống như mang, khác nhiều so với mang chia đôi của loài Schizophyllum. Các khe mang ít phổ biến hơn nhưng đặc biệt khi được tìm thấy."

Bước 2: Làm các tấm thạch dinh dưỡng để S. Com miễn dịch phát triển

Để phân lập môi trường nuôi cấy S. Commune, bạn sẽ cần một số đĩa petri chứa đầy thức ăn cho nấm. Chiết xuất mạch nha Agar là một loại thực phẩm đơn giản để làm thức ăn cho S. Commune, hay "môi trường dinh dưỡng" có thể được làm bằng các nguyên liệu dễ tiếp cận. Nó cũng là một nguồn thực phẩm tốt để sử dụng khi thực hiện các thí nghiệm khảo nghiệm enzym với S.commune và các loại nấm thối trắng hoặc nâu khác ~~ quy trình này sẽ được đề cập trong một tài liệu hướng dẫn khác.

LƯU Ý PHỤ: Nếu bạn gặp khó khăn trong việc tìm S. Commune, có nhiều loại nấm khác trong cùng một họ có thể được nuôi cấy bằng các quy trình tương tự và tốt hơn nếu không muốn nói là tốt hơn trong việc phân hủy các chất ô nhiễm gây rối loạn nội tiết. Đuôi gà tây (Trametes Versicolor) đã được tìm thấy trong nhiều nghiên cứu xem xét hàng trăm loại nấm thối trắng và nâu là những nhà sản xuất cao nhất của các enzym "lignocellulosic" làm suy giảm ô nhiễm hóa dầu. Nấm sò cũng rất tốt trong việc này.

Tôi làm công việc vi sinh của mình trong một phòng thí nghiệm sinh học cộng đồng có tên là BUGSS (Không gian Khoa học Ngầm Baltimore), nơi tôi có quyền truy cập vào các dụng cụ thủy tinh, cân kỹ thuật số, ống hình trụ chia độ, một nồi hấp (để khử trùng bằng nhiệt và áp suất của phương tiện), v.v. Các phòng thí nghiệm như thế này có đã xuất hiện trên khắp thế giới trong thập kỷ qua, vì vậy bạn có thể muốn kiểm tra danh sách này để xem liệu có ai ở gần bạn không. Nếu bạn không có một phòng thí nghiệm cộng đồng tuyệt vời như thế này trong khu vực của bạn, bạn sẽ phải đầu tư vào một số thiết bị cơ bản cho quá trình này như:

1 ~ Một thang đo kỹ thuật số để đo các thành phần của bạn một cách chính xác

2 ~ Nồi áp suất để khử trùng phương tiện của bạn bằng nhiệt và hơi nước

3 ~ Đĩa Petri, có thể mua trực tuyến khá rẻ, thủy tinh tái sử dụng hoặc nhựa dùng một lần sẽ được nhưng tái sử dụng luôn tốt hơn:)

4 ~ Một số dụng cụ thủy tinh để trộn các thành phần của bạn vào, khử trùng và cất giữ.

Nếu bạn không muốn đầu tư vào thiết bị đó, bạn có thể tìm mua các đĩa thạch chiết xuất mạch nha đã được đổ sẵn trên các trang web như Amazon ~ sẽ đắt hơn về lâu dài nếu bạn định tiếp tục làm công việc vi sinh.

Đã có rất nhiều hướng dẫn và video youtube tuyệt vời về cách tự làm đĩa petri chất dinh dưỡng tại nhà. Vì vậy, thay vì đi vào quá chi tiết về vấn đề này, tôi sẽ chỉ liên kết đến một vài - và cung cấp công thức cho 2% Malt Extract Agar, đó là môi trường dinh dưỡng mà bạn sẽ sử dụng.

Freshcap Musroom: Hướng dẫn cách làm đĩa thạch để trồng nấm tại nhà

Mykoweb: Bắt đầu với việc trồng nấm

Bảng thông số kỹ thuật Malt Extract Agar

2% Malt Extract Agar (MEA) ~~ Công thức cho 1 lít:

20g Malt Extract (nguồn cung cấp làm bia phổ biến, có thể mua trực tuyến)

15g Agar (chất làm đông đặc - thường được sử dụng để nấu ăn nên bạn có thể mua trực tuyến hoặc tại một số cửa hàng tạp hóa)

1 Lít H20 (Tôi thường sử dụng nước Thẩm thấu ngược có thể mua ở hầu hết các cửa hàng tạp hóa trong bình gallon)

Công thức này có thể dễ dàng được sửa đổi nếu bạn muốn làm số lượng ít hơn. Ví dụ, tôi thường chỉ tạo ra 250 mL mỗi lần, vì vậy tôi chỉ sử dụng 5 gam Malt Extract, 3,75 gam Agar và 250 mL nước.

Bước 3: Đổi mới món ăn Petri của bạn với nấm

Nấm bạn nhìn thấy được gọi là “quả thể” nó chỉ là một phần nhỏ của sinh vật. Phần lớn thân của nó ẩn trong cây (hoặc dưới đất), tiêu thụ gỗ. Phần này của nấm được gọi là sợi nấm. Để nuôi cấy cơ thể sợi trắng, xúc tu, thân rễ, sợi nấm của Schizophyllum lên đĩa petri, bạn sẽ lấy một mẫu thân cây, khử trùng và đặt lên đĩa MEA. Sợi nấm sẽ phát triển từ mẫu lõi thân nấm đã được khử trùng và xâm nhập vào đĩa petri, trông giống như một tấm thảm bông màu trắng.

Có thể bạn sẽ cần:

• Đĩa Malt Extract Agar (MEA) bạn đã chuẩn bị ở bước trước
• Cồn Isopropyl 70% (cồn tẩy rửa) và bình xịt
• Khăn giấy
• Dao cạo, hoặc chỉ một dao cạo bằng thép không gỉ - máy cắt hộp sẽ hoạt động
• nhíp kim loại
• găng tay
• Ngọn lửa - Tôi sử dụng đèn cồn để khử trùng dụng cụ, NonDisjunction có một hướng dẫn tuyệt vời về cách tạo một ngọn lửa ở đây.
• Bề mặt vô trùng để cắt (Tôi vừa sử dụng một đĩa petri vô trùng cho việc này)
• Parafilm, một loại màng parafin được sử dụng để dán các đĩa petri - bạn cũng có thể chỉ cần sử dụng băng che nếu không có loại này

KỸ THUẬT TIỆT TRÙNG:

Điều chính bạn muốn lưu ý khi cố gắng sử dụng kỹ thuật vô trùng là vi khuẩn và bào tử liên tục rơi trong không khí, vì vậy bạn muốn giữ cho đĩa petri của mình được che phủ càng nhiều càng tốt. Khi bạn nhấc nắp để đổ vật liệu hoặc cấy, tốt nhất bạn nên giữ nắp ngay phía trên đĩa, cho phép bạn tiếp cận bên trong theo chiều ngang, nhưng giữ nắp ở trên đĩa để ngăn vi khuẩn rơi vào. Thứ hai, bạn là một tập đoàn khổng lồ bao gồm con người, vi khuẩn, nấm và các sinh vật khác ~~ mặc dù bạn không thể nhìn thấy nó, nhưng bạn đang bị bao quanh bởi một đám mây dày đặc vi khuẩn đang khuếch tán ra khỏi cơ thể bạn. Thay vì chỉ ngồi trên bề mặt da, quần xã vi sinh vật của bạn còn vươn ra ngoài không trung ~~ sooooooo, đừng bao giờ vẫy tay trên đĩa petri hoặc nghiêng người qua đĩa mở để nhìn vào. Và đeo găng tay nếu bạn có họ;)

THIẾT LẬP KHÔNG GIAN LÀM VIỆC PHONG CÁCH CỦA BẠN

Chọn bề mặt làm việc không xốp, không có các mảnh vụn và tạp chất. Xịt dung dịch Isopropyl Alcohol 70% xuống khu vực đó và lau sạch bằng khăn giấy. Đặt ngọn lửa của bạn ở trung tâm khu vực làm việc của bạn và thắp sáng nó. Bạn sẽ muốn làm việc càng gần ngọn lửa càng tốt vì nó tạo ra một trường vô trùng nhỏ xung quanh ngọn lửa. Đặt các đĩa MEA của bạn sang một bên và mẫu nấm của bạn lên bề mặt cắt vô trùng ở phía bên kia. Tôi thường sử dụng đĩa petri vô trùng làm bề mặt cắt vô trùng cũng như chỗ để dụng cụ. Đổ một ít Isopropyl Alcohol vào một chiếc ly nhỏ - bạn sẽ dùng nó để khử trùng lưỡi dao và nhíp của mình trong khi làm việc.

* ¡~ TẬP TRUNG ~! *

Trước khi làm bất cứ điều gì, hãy khử trùng lưỡi và nhíp của bạn bằng cách nhúng chúng vào alch isopropyl và sau đó giữ chúng trên ngọn lửa một chút. Sau khi tiệt trùng, đặt chúng trên bề mặt cắt vô trùng của bạn nếu bạn đặt chúng xuống. Dùng nhíp giữ yên phần cuống nấm và cắt một đoạn ở đầu. Lấy đoạn này và cắt tất cả các bên để bạn có một khối lập phương nhỏ lõi thân nấm với tất cả các bề mặt bên ngoài đã được loại bỏ. Điều này giúp loại bỏ tất cả các vi khuẩn khác sống trên nấm để chúng không làm ô nhiễm môi trường nuôi cấy của bạn. Sau đó nhúng lõi thân vào isopropyl trong khoảng 30 giây, kéo ra và để khô trong môi trường vô trùng của ngọn lửa (không dùng ngọn lửa để làm khô vì sẽ làm chết nấm). Ngọn lửa khử trùng nhíp của bạn một lần nữa trong khi bạn đợi lõi thân cây khô. Sau đó, chỉ cần nhấc nắp của một trong các đĩa MEA của bạn vừa đủ để trượt nhíp từ bên cạnh và sử dụng nhíp đã khử trùng để đặt lõi thân vào giữa đĩa. Bịt kín đĩa bằng parafilm và trong vài tuần tới, bạn sẽ thấy sợi nấm S.com miễn dịch bám trên đĩa.

Tôi thường tạo ra một số đĩa khi làm việc với các mẫu hoang dã để nếu tôi bị nhiễm bẩn, nhiều khả năng tôi sẽ có ít nhất một lần nuôi cấy sạch.